隆重招商   最新肿瘤化疗药物敏感性检测技术 ―ATP生物荧光法 批准文号：国食药监械字200005第3070035号 应用领域：1.为肿瘤患者筛选个体化治疗方案; 　　　　　2.对现有化疗方案疗效进行评估; 　　　　　3.为新的化疗方案提供研究技术平台; 　　　　　4.提供新适应症的筛选技术平台; 　　　　　5.高通量的抗肿瘤新药筛选技术。

	ATP－生物荧光体外抗癌药物敏感性检测试剂盒 产  品  介  绍   一、概要 　　化学治疗是恶性肿瘤三大经典治疗方法之一，其趋势倾向于常规治疗。由于肿瘤对化疗药物的敏感性存在个体差异，以及肿瘤细胞具有多重抗药性（原、继发性），导致相同药对同一类型患者的治疗效果不同。而不正确的治疗会伤及机体的免疫功能和降低体能导致治疗的失败。因此，如何提高化疗用药的针对性和有效性从而实现针对性较强的个体化治疗是多年来国际上肿瘤研究领域的重要课题之一。 　　中国医学科学院肿瘤医院肿瘤研究所经多年研究，在国内首先研发成功并生产 “ATP-生物荧光体外抗肿瘤药物敏感性检测试剂盒”。该技术的应用，医生可以在了解癌症患者药物敏感和耐药谱的基础上有针对性的选择药物，为临床制定化疗方案提供直接、客观的依据，提高了化疗用药的针对性、有效性、科学性以及癌症病人的治愈率。该产品已被国家食品药品监督管理局（SFDA）批准应用于临床。 　　该技术是建立在检测肿瘤细胞ATP水平反映药物对细胞杀伤程度的先进技术，实现了操作过程标准化，在检测过程中采用荧光扫描技术实现了高通量筛选（同时筛选数十种药物），并经计算机分析处理，快速、准确、客观地对多种药物的敏感性做出评价，为受试癌症病人提出敏感和耐药的药物清单和程度顺序，为医生提供客观用药的参考指标，对实现化疗方案“个案化”具有重要价值。 　　ATP-生物荧光体外抗肿瘤药物敏感性检测试剂盒的研制成功不仅填补了国内空白，而且使我国成为继德国之后第二个独立拥有该技术知识产权的国家，其主要技术指标和性能均已达到或超过德国同类产品的水平。经北京市科委组织专家鉴定，认为该产品已达到国际先进水平。其中，在国际上首次研制出“体外肿瘤细胞选择性生长培养基”，进一步提高检测的特异性。由于该技术的创新性和领先性2003年获得国家科技部“中小企业创新基金”资助。申请发明专利一项。 二、技术创新性 　　1、基本技术原理 　　细胞内源性ATP含量与活细胞活力呈正相关。因此，测定细胞内源性ATP的含量可以反映细胞的活性和活细胞数量。荧光酶（luciferase）在有氧条件下,可以和荧光素（luciferin）结合后催化ATP转变成AMP,并且释放出荧光光子（波长为562nm）。测定所产生的荧光强度,计算ATP的含量，可推测出活细胞的数量，最终计算出各种药物对肿瘤细胞的杀伤活性。 　　2、本试剂的关键技术内容 　　⑴ 基因重组热稳定荧光素酶的研制 　　天然荧光素酶本身热稳定性很差，不能满足试剂稳定性要求，因此我们经基因克隆、点突变、发酵和表达纯化出了热稳定性良好、发光效率高的重组荧光素酶，解决了核心试剂荧光素酶的自给和稳定性。 　　我们自产的高效重组荧光素酶较德国同类试剂盒酶系统具有相同的热稳定性及发光效率。如右图所示。 图中JZJ代表自产试剂；DCS代表德国DCS公司试剂（以下同）。 　　⑵ 在国际上首先发明了肿瘤细胞选择性培养基 　　由于手术取得肿瘤标本中的肿瘤细胞所占比例只有10-30%，因此要体现药物对肿瘤细胞的特异性杀伤作用，降低非肿瘤细胞对实验的干扰是药敏检测成败的关键问题。为此，我们在国际上首先发明了肿瘤细胞选择性培养基，采用营养缺陷、加入凋亡因子及促进肿瘤细胞生长增殖的细胞因子和营养元素使肿瘤细胞经培养得到迅速增殖而非肿瘤细胞生长被抑制，经培养后的肿瘤细胞可由原来的20%扩增到75%，解决了困扰药敏检测技术发展几十年的关键技术问题，从而保证检测结果的特异性和可靠性。 经选择性培养基培养的细胞生长性能的比较表  表－2  项    目  平均克隆 形成率  标本培养 成功率  内毒素 含量 是否含 血清  原代培养克隆 形成率  自产培养基  30%   > 95%   <0.2u/ml  否  1%-5%  德国培养基  <20%   70%   <0.5u/ml  否  <1% 经选择性培养基培养前后细胞成分变化比较表  表－3  项    目  培养前细胞组成  5-7天培养后细胞组成  淋巴细胞  上皮细胞  成纤维细胞  肿瘤细胞   淋巴细胞  上皮细胞 成纤维细胞  肿瘤细胞 自产培养基  40-50%  30-40%  5-10%  5-10%   <0.1%  <1%  <10%    >75% 德国培养基  1%-5%  10-15%  20-30%  40-55%  　　⑶ 对损伤细胞进行修复 肿瘤标本经消化或进行红细胞裂解时将受到一定程度的损伤，影响细胞的生长和克隆形成。因此，我们在洗涤过程利用相应的细胞因子和营养元素对其进行修复，保证肿瘤细胞的自然生长状态，从而增加了标本中有效肿瘤细胞的获得数量，提高了药敏检测的成功率。 　　⑷ 检测分析的自动化 为提高检测分析的自动化，我们开发了相应的检测、统计分析软件，实现发光分析仪与电脑一体化，满足高通量筛选的要求。该系统具有操作简便，检测效率高（同时动态检测评估16个药物，6个药物剂量）、自动化程度高（检测数据通过发光分析仪扫描和计算机软件自动分析，并配有图象分析，结果直观可靠），高通量测定及敏感性特异性好的特点，有效避免常规实验操作当中出现的偶然误差而造成的假阴性和假阳性。 　　⑸ 与进口试剂整体技术水平的比较  表－4  项    目  自产技术  德国产试剂盒  最小检出细胞数  10  78  空白本底值  <100  320  精密度 低浓度<10% 中浓度<5% 高浓度<5%   <10%  稳定性  六个月  6个月  标本可评价率  90%  76%  与临床符合率  92%  87%  灵敏度  94%   85%  特异性  91%   90% 　　因此，本试剂整体技术水平高于进口试剂。

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